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November 2008
DyLightTM
Neue Fluoreszenzfarbstoffe
für Sekundärantikörper!
 
DyLights

Bei Dianova erhalten Sie jetzt die herausragenden DyLight-Fluoreszenzfarbstoffe mit noch besserer Leuchtkraft und Photostabilität, konjugiert an die bewährten Sekundärantikörper von Jackson ImmunoResearch, USA.

Stärkere Leuchtkraft, erhöhte Photostabilität, weniger Hintergrund

Die neuen DyLight-Antikörperkonjugate von Jackson ImmunoResearch leuchten intensiver und sind photostabiler als viele bisher erhältliche Sekundärantikörper.

Das Kopplungsverhältnis jedes Fluorophor-Antikörper-Konjugates beeinflusst maßgeblich die Leuchtintensität, Reaktivität und den Hintergrund. Um das bestmögliche Detektionsvermögen zu erreichen, wurde deshalb das optimale Kopplungsverhältnis für jedes Konjugat ermittelt.

Antikörper in unerreichter Qualität und Vielfalt

Dianova verfügt als Vertriebspartner des weltweit führenden Herstellers von Sekundärantikörpern über mehr als 250 Antikörper mit unterschiedlichen Konjugationen und Spezifitäten und darauf abgestimmte Blockierungsreagenzien.

Die bindungsstarken und hochspezifischen Sekundärantikörper werden gegen zahlreiche Serumproteine adsorbiert. Dadurch wird eine minimale Kreuzreaktivität zu anderen Spezies für Doppel- und Mehrfachfärbungen sichergestellt und eine minimale Hintergrundfärbung durch Unterbindung von Kreuzreaktionen mit Ig auf Geweben und Zellen gewährleistet.

Attraktive Preise bei versandkostenfreier Lieferung und kompetenter Beratung

dianova bietet die DyLight-Konjugate von Jackson ImmunoResearch zu attraktiven Preisen. Die Lieferung innerhalb Deutschlands ist dabei versandkostenfrei. Bei technischen Fragen steht Ihnen unser Beratungsteam aus erfahrenen Wissenschaftlern immer kompetent zur Seite.

Hohe pH-Stabilität und Wasserlöslichkeit

DyLight-Fluoreszenzfarbstoffe sind sehr gut wasserlöslich und fluoreszieren im Bereich von pH4 - pH9.


4 Spektralbereiche für gebräuchliche Filtersets und Anregungsquellen

DyLight-Konjugate erhalten Sie bei uns in 4 Spektralbereichen, die die gebräuchlichen Filtersets und Anregungsquellen im grünen bis tiefroten Spektrum abdecken. DyLight-Fluorophor-Antikörperkonjugate mit Emissions-Peaks im blauen bis infraroten Spektrum werden zurzeit getestet

DyLight Spektraleigenschaften

Abb. 1 Anregungs- (links) und Emissions- (rechts) Spektren DyLight-konjugierter und affinitätsgereinigter Sekundärantikörper. Das Bild zeigt die relative Form und Position der Anregungs- und Emissionskurven der Antikörperkonjugate. Die Kurvenhöhen wurden normalisiert und eignen sich nicht für einen quantitativen Vergleich (Spektren wurden mit dem Spektrofluorometer System, M-Serie, von Photon Technology aufgenommen).


FluorophoreAbsorption Peak (nm)Emission Peak (nm)
DyLight-488493517
DyLight 549555568
DyLight 594 591618
DyLight 649652670


Tab. 1 Absorptions- und Emissionsmaxima DyLight-konjugierter und affinitätsgereinigter Sekundärantikörper. Die Wellenlängen wurden mit dem Spektrofluorometer System, M-Serie, von Photon Technology bestimmt und können in Abhängigkeit des im Labor eingesetzten Spektrofluorometers leicht variieren.


DyLight™ 488-Konjugate sind die beste Wahl für alle Immunfluoreszenz-Applikationen mit grüner Fluoreszenz

  • Maximale Absorption bei 493 nm / Maximale Emission bei 517 nm (Abb. 1/Tab.1)

  • Stärkere Fluoreszenz als Cy2 und FITC (Abb 2/3)

  • Geringerer Hintergrund im Vergleich zu Alexa Fluor 488-Konjugaten bei gleicher Fluoreszenzintensität (Abb. 2 und 3)

  • Weniger Ausbleichen als FITC- und Cy2-Konjugate (Abb. 4), d. h. höhere Photostabilität in der Epifluoreszenzmikroskopie

  • Optimale Photostabilität, auch ohne Zusatz von Antifading-Reagenzien (Abb. 5)


    • DyLight 488 Fluoreszenz

    Abb. 2 HEp-2 Zellen wurden mit anti-ANA Antikörper (BIO-RAD) markiert und anschließend mit verschiedenen Sekundärantikörperkonjugaten inkubiert. Für die Fluoreszenzmikroskopie wurden die Zellen mit ProLong Gold (Invitrogen) (obere Reihe) oder mit PBS-90% Glycerol inklusive n-Propyl-Gallat (Fluka) als Antifading-Reagenz (untere Reihe) behandelt. Zu jedem Fluorophor wurden Felder mit den am intensivsten markierten Zellen ausgewählt und je 1 Sekunde belichtet (Vergrößerung 100x, Nikon LABOPHOT epi-Fluoreszenz Mikroskop mit Nikon D70 DSLR).

    DyLight 488 Durchflusszytometrie

    Abb. 3 Durchflusszytometrie humaner peripherer Lymphozyten. Primärantikörper: anti-CD3 / Sekundärantikörperkonjugate: DyLight 488 (grün), FITC (gelb), Cy2 (blau) von JIR und Alexa Fluor 488 von Molecular Probes (rot). Der Pfeil zeigt einen erhöhten Hintergrund der Alexa Fluor 488-Konjugate (Messung FACS Calibur, Becton Dickinson).

    DyLight 488 Fading

    Abb. 4+5 Hep-2 Zellen wurden mit anti-ANA (BIO-RAD) und Ziege anti-human IgG (H+L) konjugiert mit den angegebenen Fluorophoren gefärbt. Die Fluoreszenzintensität wurde gegen die Zeit gemessen und als Prozent der initialen Färbeintensität angegeben. Abb. 4 Fixierung in PBS + 90% Glycerol ohne Antifading-Reagenzien; Abb. 5 Dylight 488-Konjugat fixiert in verschiedenen Mounting Medien.


    DyLight™ 549- und Cy3-Konjugate bieten die maximale Empfindlichkeit für den Immunofluoreszenznachweis im orangen Bereich des sichtbaren Spektrums

  • Maximale Absorption bei 549 nm / Maximale Emission bei 555 nm (Abb. 1/Tab1)

  • Stärkere Fluoreszenz als TRITC-Konjugate / gleiche Fluoreszenzintensität wie Cy3- und Alexa Fluor 555 -Konjugate (Abb. 6)

  • Gleiche Photostabilität im Vergleich zu Alexa 555-Konjugaten / photostabiler als Cy3-Konjugate ohne anti-Fading-Reagenz (Abb 7)

  • Die Photostabilität von DyLight 549,- Cy3- und Alexa 555-Konjugaten wird durch Zusatz von Antifading-Reagenzien erhöht (Abb. 8)


    • DyLight 549 Fluoreszenz

    Abb. 6 HEp-2 Zellen wurden mit anti-ANA Antikörper (BIO-RAD) markiert, anschließend mit verschiedenen Sekundärantikörperkonjugaten inkubiert und mit Anti-Fading-Reagenzien ProLong Gold (Invitrogen, obere Reihe) oder Vectashield (Vector Labs, untere Reihe) behandelt. Felder mit den am intensivsten markierten Zellen wurden ausgewählt und je 1 Sekunde belichtet (Vergrößerung 100x, Nikon LABOPHOT epi-Fluoreszenz Mikroskop mit Nikon D70 DSLR).

    DyLight 549 Fading

    Abb. 7 + 8 Hep-2 Zellen wurden mit anti-ANA (BIO-RAD) und Ziege anti-human IgG (H+L) konjugiert mit den angegebenen Fluorophoren gefärbt, die Fluoreszenzintensität gegen die Zeit gemessen und als Prozent der initialen Färbeintensität angegeben. Fixierung in PBS + 90% Glycerol ohne Anti-Fading Reagenz (Abb. 7) und mit ProLong Gold (Invitrogen, Abb. 8). Bei Verwendung anderer Mounting Medien ähnliche Ergebnisse.


    DyLight™ 594- Konjugate sind die beste Wahl für alle Immunfluoreszenz-Applikationen im sichtbaren roten Spektrum

  • Maximale Absorption bei 591 nm / Maximale Emission bei618 nm (Abb. 1/Tab. 1)

  • Stärkere Fluoreszenz als Antikörper-Konjugate (Abb.9)

  • Bessere Farbtrennung zu grün-fluoreszierenden Farbstoffen als Cy3- und TRITC -Konjugierte Antikörper(Abb 1)

  • Gleiche Photostabilität wie Alexa 594 bei Antifading mit Prolong Gold (Invitrogen) oder Vectashield (Vectorlabs) und höhere Photostabilität als Alexa 594 mit n-Propyl Gallat (Abb. 10)


    • DyLight 594 Fluoreszenz

    Abb. 9 HEp-2 Zellen wurden mit anti-ANA (BIO-RAD) und Ziege anti-human IgG (H+L) konjugiert, mit den angegebenen Fluorophoren gefärbt und in mit ProLong Gold (Invitrogen) fixiert. Zu jedem Fluorophor wurden Felder mit den am intensivsten markierten Zellen ausgewählt und 1 Sekunde (DyLyight/Alexa) bzw. 2 Sekunden (Texas Red) belichtet (Vergrößerung 100x, Nikon LABOPHOT epi-Fluoreszenz Mikroskop mit Nikon D70 DSLR).

    DyLight 594 Fading

    Abb. 10 HEp-2 Zellen wurden mit anti-ANA (BIO-RAD) und Ziege anti-human IgG (H+L) konjugiert mit den angegebenen Fluorophoren gefärbt. Die Fluoreszenzintensität wurde gegen die Zeit gemessen und als Prozent der initialen Färbeintensität angegeben. Fixierung mit Antifading-Reagenzien ProLong Gold (Invitrogen, links), Vectashield (mitte) und PBS + 90% Glycerol mit n-Propyl-Gallat (Fluka, rechts).


    DyLight™ 649- und APC-Konjugate sind die beste Wahl für die Durchflusszytometrie und Mehrfach-Markierungen am konfokalen Mikroskop im tiefroten Emissionsbereich

  • Maximale Absorption bei 652 nm / Maximale Emission bei 670 nm (Abb. 1/Tab 1)


  • Intensivere Fluoreszenz als Cy5 (Abb. 11) und Alexa 647-Konjugate (Abb. 12)


  • DyLight 649-Antikörperkonjugate können weniger Hintergrundfärbung ergeben als Alexa 647-Konjugate (Bild 12)


    • DyLight 649 Fluoreszenz

    Abb. 11 Immunfluoreszenz benachbarter Schnitte humanen Jejunums. Primärantikörper: anti-PGP und Sekundärantikörper DyLight 649 (rot, linkes Bild) oder Cy5 (rot, rechtes Bild). Man beachte die intensivere rote Färbung mit DyLight 649 im linken Bild (Dr. Gwen Crabb und Dr. William R. Kennedy, Universität von Minnesota).

    DyLight 649 Durchflusszytometrie

    Bild 12 Durchflusszytometrie humaner peripherer Lymphozyten mit Primärantikörper: anti-CD3 und Sekundärantikörper: DyLight 649 (grün), APC (gelb), Cy5 (blau) -Konjugate von JIR und Alexa 647 (rot)-Konjugat von Molecular Probes. Der Pfeil ziegt den erhöhten Hintergrund mit dem Alexa 647-Konjugat (Messung FACS Calibur, Becton Dickinson).


    *Das Angebot gilt für alle DyLight-Konjugate. Institutsrabatte werden nicht gesondert angerechnet.
    DyLight™ Fluorescent Dyes ist ein Warenzeichen von Thermo Fisher Scientific.
    Alexa Fluor® Dyes und ProLong® Gold Antifade sind eingetragene Warenzeichen von Invitrogen.
    		 
         
     
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